玉米漿和糖蜜生物素含量測(cè)定

    由于谷氨基酸是生物素缺陷性，故在一定條件下，生物素濃度高低與谷氨酸生長(zhǎng)菌的生長(zhǎng)量呈線(xiàn)性關(guān)系。利用該特性，測(cè)定玉米漿和糖蜜中生物素含量，為車(chē)間生產(chǎn)提供指導(dǎo)。
    谷氨酸發(fā)酵生產(chǎn)中，玉米漿和糖蜜作為主要有機(jī)氨源和生物素的來(lái)源，是非常重要的源材料。因源料來(lái)源及處理方法不同而造成每批玉米漿及糖蜜的生物素含量不穩(wěn)定，從而對(duì)谷氨酸發(fā)酵產(chǎn)酸，糖酸轉(zhuǎn)化率等造成重大影響，因此如何準(zhǔn)確地測(cè)定二者生物素含量至關(guān)重要。由于谷氨酸菌種是生物素缺陷型，故在一定條件下，生物素濃度的高低與谷氨酸生產(chǎn)菌的生產(chǎn)量呈線(xiàn)性關(guān)系。因此，采用微生物法，測(cè)定玉米漿及糖蜜的生物素含量，從而為大罐發(fā)酵生產(chǎn)提供指導(dǎo)。

1.材料和方法
1.1菌種
　　谷氨酸生產(chǎn)菌
1.2一級(jí)種子培養(yǎng)基
　　葡萄糖2.5%，玉米漿2.6%，磷酸銨二鉀0.12%，硫酸鎂0.06%，尿素0.55%，PH7.0.
1.3生物鑒定用菌的培養(yǎng)基配方
　　分析葡萄糖14.5%硫酸鎂0.065%，磷酸銨二鉀0.16%氯化鉀0.03%，硫酸亞鐵，硫酸錳個(gè)0.0002%，PH7.0（自然PH），在0.1Mpa壓力下滅菌15min，備用。
1.4 標(biāo)準(zhǔn)生物素溶液的配置
　　精確稱(chēng)取10Mg試劑生物素，定容500ml，在吸取1ml上訴稀釋液，定容到500ml,得到0.04μg/ml標(biāo)準(zhǔn)樣，在0.1Mpa壓強(qiáng)下滅菌15min后備用。
1.5標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制
　　取500ml無(wú)菌三角瓶，按表1分別不同量的鑒定用培養(yǎng)基溶液，各加不同量的生物素標(biāo)準(zhǔn)樣品，已消20%尿素及菌液。于32℃±1℃搖床培養(yǎng)12h，下?lián)u床后搖勻，用581-s型光電比色計(jì)，以650nm濾光板測(cè)定光密度（OD）。以樣品OD于空白OD之差為縱軸，以生物素含量為橫軸，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

    1.6樣品中生物素含量的測(cè)定
　　取滅菌后的500ml三角瓶，加入18ml鑒定用培養(yǎng)基，0.1ml蒸餾水。0.5ml（20%）尿素和0.4ml一級(jí)種子，在加上1ml帶測(cè)定樣品（已稀釋并滅菌），其他操作同上，漿樣品測(cè)得的OD值去空白的OD值，即得實(shí)測(cè)得OD值。樣品的稀釋倍數(shù)，依生物素含量的多少而異。一般應(yīng)控制在含10μg/L一下為宜。
結(jié)果計(jì)算：
　　樣品OD值-空白OD值=實(shí)測(cè)OD值，根據(jù)回歸函數(shù)計(jì)算X值，將X值*稀釋倍數(shù)即得出樣品生物素含量（μg/L）。
    結(jié)果與討論

　　根據(jù)表2作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖1.對(duì)結(jié)果進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得到回歸函數(shù)：Y=0.0154X+0.005R²=0.9972
　　待測(cè)玉米漿樣：V_H(X)=8.12×100=812μg/kg
　　待測(cè)甘蔗糖蜜樣：V_H(X))=7.47×500=3735μg/kg

　　我們將實(shí)驗(yàn)結(jié)果用來(lái)指導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)，取得了良好的效果。車(chē)間在更換玉米漿和糖蜜批次時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)基配方調(diào)整及時(shí)準(zhǔn)備。（本文搜集整理于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)之處，請(qǐng)聯(lián)系我們刪除。）